VCAM-1 RUO Elisa Kit Human Vascular Endothelial Cell Adhesion Molecule 1

Productbeschrijving:

Doel

Deze kit maakt het mogelijk de concentraties van VCAM-1 in menselijk serum, celcultuursupernaten en andere biologische vloeistoffen te bepalen.

Beginsel van de test

Het kit meet het niveau van menselijk VCAM-1 in het monster, gebruik het gezuiverde menselijke VCAM-1 antilichaam om de microtiterplaatputten te bedekken, maak een antilichaam in vaste fase, voeg dan VCAM-1 toe aan de putten,Gecombineerd VCAM-1-antilichaam dat met HRP gemarkeerd is, wordt antilichaam-antigeen-enzym-antilichaamcomplex, na wassen Volledig, voeg TMB-substraatoplossing toe, TMB-substraat krijgt een blauwe kleur Bij HRP enzymgekatalyseerd,De reactie wordt beëindigd door toevoeging van een oplossing van zwavelzuur en de kleurverandering wordt spectrophotometrisch gemeten op een golflengte van 450 nmDe concentratie van Human VCAM-1 in de monsters wordt vervolgens bepaald door de O.D. van de monsters met de standaardcurve te vergelijken.

Materiaal dat bij de kit wordt geleverd

Technische parameters:

Vaststelling van het monster

• De proefpersonen moeten zo spoedig mogelijk na het verzamelen van het exemplaar en volgens de relevante literatuur worden geëxperimenteerd en zo spoedig mogelijk na de extractie worden geëxperimenteerd.het monster kan bij -20 °C worden bewaard omVermijd herhaalde bevriezing-ontdooiing cycli.
• Kan het monster dat NaN3 bevat niet detecteren, omdat NaN3 HRP-actief remt.

Beoordelingsprocedure

• Verdunning en toevoeging van het monster: Verdunning Oorspronkelijke dichtheid Standard als in de volgende tabel:

2. Proef toevoegen: de lege putten apart plaatsen (in lege vergelijkingsputten worden geen monster en HRP-Conjugate reagens toegevoegd, anders is elke stap dezelfde werking).Voeg 50 μl standaard toe aan Microelisa stripplate, voeg proefverdunning 40μl toe aan het proefputje, voeg vervolgens proefproef 10μl toe (de eindverdunning van het proefputje is 5 maal), voeg proefput in de putten, raak de putwand zo veel mogelijk niet aan en meng voorzichtig.

3Incuberen: Na het sluiten van de plaat met het sluiterplaat membraan, incuberen gedurende 30 min bij 37°C.

4. Configureer vloeistof: 30-voudig (of 20-voudig) wasoplossing, 30voudig (of 20-voudig) verdund met gedistilleerd water en reserve.

5. Wassen: Ontdek sluitplaat membraan, gooi vloeistof, droog door swing, voeg wasbuffer aan elke put, nog steeds voor 30s dan afvoeren, herhalen 5 keer, droog door kloppen.

6. toevoegen van enzym: toevoegen van HRP-Conjugate reagens 50 μl aan elke put, behalve een lege put.

7Incubatie: operatie met 3.

8Wassen: operatie met 5.

9. Kleur: voeg chromogeenoplossing A 50ul en chromogeenoplossing B 50ul toe aan elk putje, laat het licht gedurende 10 minuten bij 37°C behouden

10. Stop de reactie: Voeg Stop Solution50μl toe aan elke put, Stop de reactie ((de blauwe kleur verandert in gele kleur).

11. Onderzoek: neem een lege put als nul, lees de absorptie bij 450 nm na toevoeging van stopoplossing en binnen 15 min

Bereken:

Neem de standaarddichtheid voor de horizontale, de OD-waarde voor de verticale, teken de standaardcurve op grafiekpapier,Zoek de overeenkomstige dichtheid volgens de OD-waarde van de steekproef door de steekproefcurve, vermenigvuldigd met het verdunningsmultipel, of de rechte regressievergelijking van de standaardcurve met de standaarddichtheid en de OD-waarde berekenen, met de steekproefwaarde van de OD-waarde in de vergelijking,berekenen van de monsterdichtheid, vermenigvuldigd met de verdunningsfactor, is het resultaat de werkelijke dichtheid van het monster.