Human Free Heme RUO ELISA Assay Kit RESEARCH GEBRUIKEN Alleen voor medische diagnose

Doel:

Deze set maakt het mogelijk de concentraties van vrij heme in volbloed te bepalen.

Beginsel van de test

De kit toets het niveau van vrij menselijk heme in het monster, gebruik het gereinigde menselijke vrije heme antilichaam om de microtiterplaten te bedekken, maak een vaste fase antilichaam, voeg dan vrij heme toe aan de putten,Gecombineerd vrij heme-antilichaam dat met HRP is gemarkeerd, wordt antilichaam-antigeen-enzym-antilichaamcomplex, na wassen Volledig, voeg TMB-substraatoplossing toe, TMB-substraat krijgt een blauwe kleur Bij HRP enzymgekatalyseerd,De reactie wordt beëindigd door toevoeging van een oplossing van zwavelzuur en de kleurverandering wordt spectrophotometrisch gemeten op een golflengte van 450 nmDe concentratie van Human Free Heme in de monsters wordt vervolgens bepaald door de overdosis van de monsters te vergelijken met de standaardcurve.

Technische parameters:

Materiaal dat bij de kit wordt geleverd:

Vaststelling van het monster

• De proefpersonen moeten zo spoedig mogelijk na het verzamelen van het exemplaar en volgens de relevante literatuur worden geëxperimenteerd en zo spoedig mogelijk na de extractie worden geëxperimenteerd.het monster kan bij -20 °C worden bewaard omVermijd herhaalde bevriezing-ontdooiing cycli.
• Kan het monster dat NaN3 bevat niet detecteren, omdat NaN3 HRP-actief remt.

Beoordelingsprocedure

• Verdunning en toevoeging van het monster: Verdunning Oorspronkelijke dichtheid Standard als in de volgende tabel:

2.monster toevoegen: de lege putten apart plaatsen (in lege vergelijkingsputten worden geen monster en HRP-Conjugate reagens toegevoegd, anders is elke stapsoperatie hetzelfde).Voeg 50 μl standaard toe aan Microelisa stripplateVoeg 40 μl proefverdunning toe aan de proefput, voeg vervolgens 10 μl proefput toe (de eindverdunning van de proef is 5 keer zo hoog), voeg het proefput toe aan de putten, raak zo veel mogelijk niet aan de putwand en meng voorzichtig.

3.Incuberen: Na het sluiten van de plaat met het sluitingsplaatmembraan, incuberen gedurende 30 min bij 37°C.

4.Vloeistof instellen: 30-voudig ((of 20-voudig) wasoplossing, 30voudig (of 20-voudig) verdund met gedistilleerd water en reserve.

5.wassen: ontgrendelen sluitplaat membraan, weggooien Vloeistof, droog met schommeling, voeg wasbuffer toe aan elke put, blijf 30 minuten staan dan afvoeren, herhaal 5 keer, droog met een klop.

6. toevoegen van enzym: toevoegen van HRP-Conjugate reagens 50μl aan elke put, behalve een lege put.

7.incuberen: operatie met 3.

8.wassen: operatie met 5.

9.kleur:Voeg chromogeenoplossing A 50ul en chromogeenoplossing B 50ul toe aan elke put, laat lichtbehoud gedurende 10 minuten bij 37°C

10Stop de reactie: Voeg Stop Solution50μl toe aan elke put, Stop de reactie ((de blauwe kleur verandert in gele kleur).

11.test: neem een lege put als nul, lees de absorptie bij 450 nm na het toevoegen van stopoplossing en binnen 15 min.

Bereken

Neem de standaarddichtheid voor de horizontale, de OD-waarde voor de verticale, teken de standaardcurve op grafiekpapier,Zoek de overeenkomstige dichtheid volgens de OD-waarde van de steekproef door de steekproefcurve, vermenigvuldigd met het verdunningsmultipel, of de rechte regressievergelijking van de standaardcurve met de standaarddichtheid en de OD-waarde berekenen, met de steekproefwaarde van de OD-waarde in de vergelijking,berekenen van de monsterdichtheid, vermenigvuldigd met de verdunningsfactor, is het resultaat de werkelijke dichtheid van het monster.