|
Productdetails:
|
| Doel: | voor onderzoek SLECHTS gebruik | Opslag: | 2-8℃ |
|---|---|---|---|
| Specificatie: | 48wells/96wells | Methode: | Broodje |
| Kat. Nr.: | In-Mo1153 | Cv (%): | SD/meanX100 |
| Markeren: | E Cadherin Elisa Kit,Muise Cad Elisa Kit,Onderzoek E Cadherin Elisa Kit |
||
Muis e-Cadherin, e-Cad ELISA Kit
Deze ELISA-uitrusting gebruikt sandwich-ELISA als methode. Microelisa stripplate in deze uitrusting wordt verstrekt pre-coated met een antilichaam specifiek voor e-Cad die. De normen of de steekproeven worden toegevoegd aan de aangewezen putten van Microelisa stripplate en aan het specifieke antilichaam gecombineerd. Dan een Mierikswortelperoxidase (HRP) - het vervoegde antilichaam specifiek voor e-Cad wordt toegevoegd aan elke Microelisa stripplate goed en uitgebroed. De vrije componenten worden gereinigd. De TMB-substraatoplossing wordt goed toegevoegd aan elk. Slechts zullen die putten die e-Cad en HRP vervoegd antilichaam bevatten e-Cad blauw in kleur lijken en zullen dan geel na de toevoeging van de eindeoplossing worden. De optische dichtheid (OD) wordt gemeten spectrofotometrisch bij een golflengte van 450 NM. De OD waarde is evenredig aan de concentratie van e-Cad. U kunt de concentratie van e-Cad in de steekproeven berekenen door OD van de steekproeven bij de standaardkromme te vergelijken.
Materialen van de uitrusting worden voorzien die
| Materialen van de uitrusting worden voorzien die | 48 bepalingen | 96 bepalingen | Opslag | |
| 1 | Gebruikershandleiding | 1 | 1 | R.T. |
| 2 | Het membraan van de sluitingsplaat | 2 | 2 | R.T. |
| 3 | Verzegelde zakken | 1 | 1 | R.T. |
| 4 | Microelisa stripplate | 1 | 1 | 2-8℃ |
| 5 | Norm: 108pg/ml | 0.5ml×1 fles | 0.5ml×1 fles | 2-8℃ |
| 6 | Standaardverdunner | 1.5ml×1 fles | 1.5ml×1 fles | 2-8℃ |
| 7 | HRP-verenigde reagens | 3ml×1 fles | 6ml×1 fles | 2-8℃ |
| 8 | Steekproefverdunner | 3ml×1 fles | 6ml×1 fles | 2-8℃ |
| 9 | Chromogene stofoplossing A | 3ml×1 fles | 6ml×1 fles | 2-8℃ |
| 10 | Chromogene stofoplossing B | 3ml×1 fles | 6ml×1 fles | 2-8℃ |
| 11 | Eindeoplossing | 3ml×1 fles | 6ml×1 fles | 2-8℃ |
| 12 | Wasoplossing | 20ml (20X) ×1bottle | 20ml (30X) ×1bottle | 2-8℃ |
Procedure
Verdunning van Normen
1.Ten-de putten worden geplaatst voor normen in een Microelisa stripplate. In goed 1 en goed 2, worden de Standaardoplossing van 100μl en de Standaard de Verdunningsbuffer van 50μl goed toegevoegd en gemengd. In goed 3 en goed 4, 100μl-wordt de oplossing van goed 1 en goed 2 respectievelijk toegevoegd. Dan wordt de Standaard de Verdunningsbuffer van 50μl goed toegevoegd en gemengd. 50μl de oplossing wordt verworpen van goed 3 en goed 4. In goed 5 en goed 6, 50μl-wordt de oplossing van goed 3 en goed 4 respectievelijk toegevoegd. Dan wordt de Standaard de Verdunningsbuffer van 50μl goed toegevoegd en gemengd. In goed 7 en goed 8, 50μl-wordt de oplossing van goed 5 en goed 6 respectievelijk toegevoegd. Dan wordt de Standaard de Verdunningsbuffer van 50μl goed toegevoegd en gemengd. In goed 9 en goed 10, 50μl-wordt de oplossing van goed 7 en goed 8 respectievelijk toegevoegd. Dan wordt de Standaard de Verdunningsbuffer van 50μl goed toegevoegd en gemengd. 50μl de oplossing wordt verworpen van goed 9 en goed 10. Na verdunning, is het totale volume in alle putten 50μl en de concentraties zijn 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml en 2ng/ml, respectievelijk.
2. In Microelisa stripplate, verlaat goed leeg als lege controle. In steekproefputten, 40μl-worden de buffer van de Steekproefverdunning en 10μl-de steekproef toegevoegd (de verdunningsfactor is 5). De steekproeven zouden op de bodem moeten worden geladen zonder de putmuur te raken. Mengeling goed met het zachte schudden.
3. Incubatie: broed 30 min bij 37℃ na verzegeld met het membraan van de Sluitingsplaat uit.
4. Verdunning: verdun de geconcentreerde wassende buffer met gedistilleerd water (30 keer voor 96T en 20 keer voor 48T).
5. Het wassen: zorgvuldig zuigt de schil van het membraan van de Sluitingsplaat, en nieuwe vulling met de wasoplossing op. Verwerp de wasoplossing na het rusten 30 seconden. Herhaal de wasprocedure voor 5 keer.
6. Voeg HRP-Verenigde reagens 50 μl goed aan elk behalve de lege controle toe goed.
7. Incubatie zoals die in Stap 3 wordt beschreven.
8. Wassen zoals beschreven in Stap 5.
9. Het kleuren: Voeg 50 μl Chromogene stofoplossing A en 50 μl Chromogene stofoplossing B goed aan elk toe, meng me met zacht het schudden en broed bij 37℃ uit 15 minuten. Gelieve te vermijden licht tijdens het kleuren.
10. Beëindiging: voeg 50 μl eindeoplossing goed aan elk toe om de reactie te eindigen. De kleur in zou goed van blauw tot geel moeten veranderen.
11. Lees absorbering O.D. bij 450nm gebruikend een Microtiter Plaatlezer. De OD waarde van de lege controle wordt goed geplaatst als nul. De analyse zou binnen 15 minuten moeten worden uitgevoerd na het toevoegen van eindeoplossing.
Precisie
Intra-analyseprecisie (Precisie binnen een analyse): 3 steekproeven met lage, midden en op hoog niveau e-Cad werden getest 20 keer op één plaat, respectievelijk.
Inter-analyseprecisie (Precisie tussen analyses): 3 steekproeven met lage, midden en op hoog niveau e-Cad werden getest op 3 verschillende platen, 8 her*halen in elke plaat.
Cv (%) = SD/meanX100
Intra-analyse: Cv<10>
Inter-analyse: Cv<12>
Analysewaaier
0.6pg/ml -80pg/ml
Gevoeligheid:
0,1 pg/ml
Contactpersoon: Mr. Steven
Tel.: +8618600464506
