1.Bereken het gewenste aantal microgaten.
herverzegelbare plastic zak, verzegeld en bewaard bij 2-8°C voor later gebruik.
2.Voeg kalibratoren en monsters toe:
2.1 Leeg put: reagentia worden niet toegevoegd.
2.2 Kalibratorputten: Voeg 100 μL kalibratorputten toe aan de aangewezen regelputten.
2.3 Proefputten: Voeg 100 UL Probeverdunner toe aan de proefputten en voeg vervolgens 10 UL proef in de overeenkomstige put toe.
2.4 Schudt de plaat voorzichtig gedurende 20 seconden en bedekt vervolgens de plaat met de afdichter.
3Incuberen: Incuberen van de plaat bij 37°C gedurende 30 minuten.
4. Wasstap (kan handmatig of met automatisch wassen worden uitgevoerd):
Handwassen: verwijder het incubatiemengsel voorzichtig door de oplossing in een afvalcontainer te gooien.
Verwijder de wasoplossing volledig, herhaal 4
Nadat de laatste wasstap is voltooid, tik je op het absorberend papier om overgebleven vloeistof te verwijderen.
Automatisch wassen: de automatische afwasmachine moet worden gekalibreerd om een efficiënt wassen te garanderen.
verdund wasbuffer en week gedurende 20 tot 30 seconden.
5Conjugate: voeg 100 μL conjugate toe in elke put, behalve de lege put.
6Incuberen: de putten bedekken en incuberen bij 37°C gedurende 30 minuten.
7Wasstap: was de plaat 5 keer zoals beschreven in stap 4.
8Substraat: voeg 50 μL Substraat A en 50 μL Substraat B toe aan elke put, inclusief de lege put.
In een microwell gedurende 20 seconden, incuberen bij 37°C in het donker gedurende 15 minuten.
9. Stopoplossing: voeg 50 μL Stopoplossing toe aan elke put. In putten met positieve specimens moet een gele kleur ontstaan.
10. Lezen van resultaten: Lezen bij 450/630-700 nm binnen 30 minuten.
1Opmerking: Microplaten kunnen ook bij 450 nm worden afgelezen, maar het wordt ten zeerste aanbevolen om deze bij 450/630-700 nm te lezen voor
betere resultaten.
Chronometrie: lees de optische dichtheid (OD) van het monster bij 450 nm met een microplatenlezer.
De gemiddelde OD-waarde van de negatieve controle ≤ 0,1 en de gemiddelde OD-waarde van de positieve controle ≥ 0.8, is de test geldig,
anders is de test ongeldig.
Cut-Off-waarde (CO) = De gemiddelde OD-waarde van de negatieve controle x 3 (berekend met 0,10 wanneer de gemiddelde
De OD-waarde van de negatieve controle is < 0.10, berekend op basis van de werkelijke waarde wanneer de gemiddelde negatieve controle OD
Positieve resultaten: OD-waarde ≥ CO.