De antiuitrustingen van de het Antilichamentest van Elisa Test Kit Anti TPO van de Schildklierperoxidase

Anti-Thyroid anti-TPO Peroxidase Elisa Kit

1. Bestemming

Immunoassay voor de kwantitatieve bepaling in vitro van antilichamen aan schildklierperoxidase in menselijk serum. De antibepaling van ‐ wordt TPO gebruikt als hulp in de diagnose van auto-immune schildklierziekten.

2. Samenvatting

• ‐ Is de schildklier-specifieke peroxidase (TPO) aanwezig op de microsomen van thyrocytes en aan zijn apicale celoppervlakte uitgedrukt. In synergisme met thyroglobulin (Tg) dit enzym heeft een essentiële functie in iodination van de tyrosine van L ‐ en de chemische koppeling van het voortvloeien monoiodotyrosine van ‐ en van Di ‐ om de schildklierhormonen T4, T3, en fT3 te vormen.
• TPO is een potentiële autoantigen. De opgeheven serumtiters van antilichamen aan TPO worden in verscheidene die vormen van thyreoditis gevonden door auto-immuniteit worden veroorzaakt. De nog vaak gevonden die term „microsomal antilichaam“ komt uit de tijd voort toen TPO nog niet als antigeen in auto-immuniteit geïdentificeerd was door microsomen wordt veroorzaakt. In de klinische betekenis kunnen de twee termijnen anti‐ TPO en microsomal antilichaam synonymously worden gebruikt; er zijn verschillen, echter, met betrekking tot de testmethodes.
• De hoge antititers van ‐ worden TPO gevonden in maximaal 90% van patiënten met het thyreoditis van chronische Hashimoto. In de ziekte van Graven, hebben 70% van de patiënten een opgeheven titer. Hoewel de gevoeligheid van de procedure kan worden verhoogd door andere schildklierantilichamen (anti de receptor‐ antilichaam van ‐ Tg, van TSH ‐ - TRAb) gelijktijdig te bepalen, het negatieve sluit vinden niet de mogelijkheid van een auto-immune ziekte uit. De omvang van de antilichamentiter correleert niet met de klinische activiteit van de ziekte. Kunnen de aanvankelijk opgeheven titers na lange periodes van ziekte of tijdens vermindering negatief worden. Als de antilichamen na vermindering weer verschijnen, dan is een instorting waarschijnlijk.
• Terwijl de gebruikelijke microsomal antilichamentests ongezuiverde microsomen als antigeenvoorbereiding aanwenden, gebruiken de antitests van ‐ TPO een gezuiverde peroxidase. De twee procedures zijn van vergelijkbare prestaties in termen van klinische gevoeligheid, maar de betere consistentie van de partij kan ‐ aan ‐ partij en hogere klinische specificiteit van de antitests worden verwacht van ‐ TPO toe te schrijven aan de betere kwaliteit van het gebruikte antigeen. Het Enzym verbond immunosorbent het antigeen en het konijn anti-menselijke antilichamen van IgG van het analysesgebruik de menselijke (met elkaar anti-IgG).

3. Testprincipe

Indirecte methode, totale duur van analyse: 70 minuten.

Anti-TPO ELISA wendt stevige fase, indirecte ELISA-methode voor opsporing van antilichamen aan TPO in incubatieprocedure in twee stappen aan. De polystyreen microwell stroken zijn pre met een laag bedekt met hoogst immunoreactive menselijke TPO-antigenen. Tijdens de eerste incubatiestap, zullen de specifieke antilichamen anti-TPO, als heden, aan de stevige fase pre-coated TPO antigenen worden gebonden. De putten worden gewassen om unbound serumproteïnen te verwijderen, en antilichamen van konijn worden de anti-menselijke die IgG (anti-IgG) aan de peroxidase van de enzymmierikswortel worden vervoegd (Stamverwant HRP-) toegevoegd. Tijdens de tweede incubatiestap, deze HRP-Vervoegde antilichamen zullen aan om het even welk antigeen-antilichaam (IgG) compliceert eerder gevormd worden gebonden en de unbound HRP-Stamverwant wordt dan verwijderd door was. De chromogene stofoplossingen die het peroxyde van Tetramethylbenzidine (TMB worden) bevatten en van het ureum toegevoegd aan de putten en in aanwezigheid van antigeen-antilichaam-anti-IgG (HRP) immunocomplex, worden de kleurloze Chromogene stoffen gehydroliseerd door de verbindende HRP-stamverwant aan een blauw-gekleurd product. De blauwe kleurendraaien geel na het tegenhouden van de reactie met zwavelzuur.

De hoeveelheid kleurenintensiteit kan worden gemeten en die het is evenredig aan de hoeveelheid antilichaam in de putten wordt gevangen, en aan de hoeveelheid antilichaam in de respectievelijk steekproef.

4. Verstrekte reagentiamaterialen

• Met een laag bedekte Microplate, 8 X12-stroken, 96 putten. Pre-coated met menselijk TPO-antigeen.

• Kalibermeters, 6 flesjes, 1 ml elk, klaar te gebruiken; Concentraties: 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) EN 500 IU/ML (VAN F).

• Enzymstamverwant, 1 flesje, 11,0 ml het geëtiketteerde konijn van van HRP (mierikswortelperoxidase) anti menselijke IgG-antilichamen (anti-IgG) in buffer tris-NaCl die BSA bevatten (runderserumalbumine). Bevat 0,1% ProClin300-bewaarmiddel.

• Serumverdunner: 1 flesje, 11mL. Het bevatten van bufferzouten en een kleurstof

• Het Concentraat van de wasoplossing, 1 flesje, 25 ml (geconcentreerde 40X), PBS-Tween wasoplossing.

• Substraat, 1 flesje, 11ml, klaar te gebruiken, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Eindeoplossing, 1 flesje, 6,0 ml 1 mol/l-zwavelzuur.

• IFU, 1 exemplaar.

• Plaatdeksel: 2 stukken.

Vereiste materialen (maar verstrekt niet)

• Microplatelezer met de golflengte absorberend vermogen van 450nm en 620nm-.

• Microplatewasmachine.

• Incubator.

• Plaatschudbeker.

• Micropipettes en micropipettes die met meerdere kanalen 50µl met een precisie leveren van dan beter 1,5%.

• Absorberend document.

• Gedistilleerd water

5. Testprocedure

• Het gebruik slechts het aantal putten vereiste en formatteert de microplateputten voor elke te analyseren kalibermeter en steekproef.

• Voeg 100 µL goed van kalibermeters aan elk toe.

• Voeg 100 µL van Steekproefverdunner (Groene kleur) goed aan elk behalve de kalibermeter-Putten toe.

• Voeg 10 µL goed toe van Steekproef aan elke Steekproefverdunner (NOTA: De reagentia in Putten zullen Blauwe kleur van Groen), dan schok 30 seconden draaien.

• Behandel de plaat met een plaatdeksel en broed bij 37 °C 30 minuten uit.

• Verwerp de inhoud van de micro- plaat door klaring of aspiratie. Als het overhevelen, onttrek en bevlek de plaat droog met absorberend document.

• Voeg 350 µL van wasoplossing toe, hevel (kraan en vlek) over of zuig op. Herhaal 4 extra tijden voor een totaal van 5 wassen. Aan het eind van was, keer de plaat om en onttrek uit om het even welke overblijvende wasoplossing op absorberend document.

• Voeg 100 µL van enzymstamverwant toe,

• Behandel de plaat met een plaatdeksel en broed bij 37 °C 30 minuten uit.

• Voeg 350 µL van wasoplossing toe, hevel (kraan en vlek) over of zuig op. Herhaal 4 extra tijden voor een totaal van 5 wassen. Aan het eind van was, keer de plaat om en onttrek uit om het even welke overblijvende wasoplossing op absorberend document.

• Voeg 100 µL goed van Substraat aan elk toe. Behandel en broed bij omgevingstemperatuur (18-25℃) in dark voor reactie uit 10 minuten. Schud niet de plaat na substaattoevoeging.

• Voeg 50 µL goed van eindeoplossing aan elk toe.

• Schok 15-20 seconden om de vloeistof binnen de putten te mengen. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de blauwe kleur volledig in geel verandert.

• Lees de absorbering goed van elk bij 450 NM die (620 tot 630 NM gebruiken als verwijzingsgolflengte om onvolmaaktheden goed te minimaliseren) in een micro- plaatlezer. De resultaten zouden binnen 30 minuten moeten worden gelezen na het toevoegen van de eindeoplossing.