TB-IGRA ELISA-testkit

1. Beginsel

TB-IGRA is eenin vitrodiagnostische test die celgemedieerde immuunreacties opMycobacterium tuberculosis(MTB) infectie door het meten van interferon-gamma (IFN-γ) dat wordt vrijgegeven door gevoelige T-cellen bij stimulatie met MTB-specifieke antigenen (bijv. ESAT-6, CFP-10 en TB7.7).

2. Belangrijkste kenmerken

• Hoge specificiteit:

  • Gebruikt MTB-specifieke antigenen (afwezig in BCG en de meeste niet-tuberculose mycobacteriën), waardoor valse posities worden geminimaliseerd.

• Hoge gevoeligheid:

  • Het detecteert zowel actieve TB als latente TB-infectie (LTBI) met een superieure nauwkeurigheid in vergelijking met tuberculine huidtest (TST).

• kwantitatieve en kwalitatieve resultaten:

  • De uitslag varieert per platform (bijv. spotgetallen in ELISPOT-assays of IFN-γ-concentratie in ELISA).

• Een snelle ommekeer: Resultaten meestal beschikbaar binnen24 ∙ 48 uur.

3. Voorbeeldenvereisten

• Typ van monster: Vers perifere volbloed (heparineerd).

• VolumeGewoonlijk:1 ¢ 3 mlper test (afhankelijk van de kitfabrikant).

• Bewaarplaats: Proces binnen8 ∙ 32 uur(afhankelijk van de specificaties van de kit).

4Procedure van beoordeling

1. Stimulatie: Incuberen van bloed met MTB-antigenen en controles (negatieve/mitogene controle).

2. IFN-γ-detectie:

   • ELISPOT-gebaseerd (bv. T-SPOT.TB): tel IFN-γ-scheidende T-cellen als vlekken.

   • op basis van ELISA (bijv. QuantiFERON-TB Gold): IFN-γ-concentratie met behulp van immunoassay worden gemeten.

3. Interpretatie:

   • Resultaten in vergelijking met de grenswaarden (verschillen per test).

   • Onbepaalde resultaten kunnen opnieuw testen vereisen.

5. Prestatiemeters

• Gevoeligheid: > 90% voor actieve TB, ~ 80% voor LTBI.

• Specificiteit: >95% (niet beïnvloed door BCG-vaccinatie).

• Kruisreactiviteit: Minimaal bij niet-tuberculose mycobacteriën (NTM).

6. Indicaties

• Screening op LTBI bij risicogroepen (bijv. HIV+, immuunonderdrukt patiënten, nauwe contacten).

• Aanvullende test voor actieve TB-diagnose (moet samenhangen met klinische symptomen en andere tests).

7Voordelen ten opzichte van TST

• Geen kruisreactiviteit met BCG.

• Eenmalig onderzoek (geen teruggave van de lezing).

• Objectieve, lab-gebaseerde resultaten.

8Beperkingen

• Kan geen onderscheid maken tussen actieve TB en LTBI.

• Het vereist gespecialiseerde laboratoriumapparatuur.

• Hogere kosten dan TST.

• Potentiële valse negatieven bij immuunschade.

9. Compatibele kits (voorbeelden)

• T-SPOT.TB(Oxford Immunotec): gebaseerd op ELISPOT.

• QuantiFERON-TB Gold Plus(Qiagen): gebaseerd op ELISA.

10. Regelgeving

• Goedgekeurd door de FDA/CE/WHO voor het screenen van tuberculose-infecties.

In vitro-diagnose

Alleen voor gebruik

Deze set bevat reagentia die voldoende zijn voor de test van maximaal 28 monsters in een test.

1Negatieve controle (grijs deksel)

2. TB-antigeen, gevriesdroogd (paars deksel)

3TB-antigeenverdunner (paars deksel)

4Positieve controlegroep (Rode dop) 28tests 28tests 0.9mL 28tests

ELISA-componenten

1. Microplatenstrips

2Humane IFN-γ standaard, gevriesdroogd (blauw deksel)

3. Verdunningsmiddel

4Biotine-gemerkte antilichaam (gele dop) 12 x 8 putten 2 x injectieflacon 1 x 40 ml 1 x 6 ml

5. Enzymconjugat 100X Concentraat (Brown fles) 1 x 130μL

6. Wassen Buffer 10X Concentratie 1 x 40 ml

7Chromogeenoplossing A

8Chromogeenoplossing B

9. Stopoplossing 1 x 6 ml 1 x 6 ml 1 x 6 ml

PRINCIPE VAN DE TEST